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    石蠟切片的蘇木精-伊紅HE染色詳解


          蘇木精-伊紅染色方法,簡稱HE染色方法,是生物學和醫學的細胞與組織學最廣泛應用的染色方法。在病理學實驗室中稱為常規染色方法。病理細胞和組織學的診斷,教學和研究都是用HE染色方法觀察正常和病變組織的形態結構。因此病理學工作者必需學習和掌握這種染色方法。


    (一)HE染色的基本原理

     1.細胞核染色的原理

          細胞核內的染色質主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結構中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結合而染色。蘇木精在堿性染料中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。

    2.細胞漿染色的原理

          細胞漿內主要成分是蛋白質,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。伊紅是細胞漿的良好染料。

          隨著科學技術快速發展和電子計算機的廣泛應用,染色自動儀器的出現,許多實驗室已用全自動染色機代替人工染色。


    (二)人工操作蘇木精伊紅染色方法

     1.染色步驟

          二甲苯I脫蠟10min.

          二甲苯II脫蠟5min。

          無水乙醇洗去二甲苯1min×2次。

          95%酒精1min。

          90%酒精1min。

          85%酒精1min。

          自來水洗2min。

          蘇木精染色1min5min。

          自來水洗1min。

          1%鹽酸酒精分化20s。

          自來水洗1min。

          稀氨水(1%)反藍30s。

          自來水洗或蒸餾水洗1min。

          伊紅染色20s5min。

          自來水洗30s。

          85%酒精脫水20s。

          90%酒精30s。

          95%I酒精1min。

          95%II酒精1min。

          無水乙醇I 2min。

          無水乙醇II 2min。

          二甲苯I 2min。

          二甲苯II 2min。

          二甲苯III 2min。

          中性樹膠或加拿大樹膠封片。

    2.染色結果

          細胞核呈藍色,細胞漿、肌肉、結締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色。


    (三)染色液的配制

    1.蘇木精(素)

          蘇木精是一種純天然染料,是從蘇木素樹提煉出來的,蘇木樹主產墨西哥的坎偑切,蘇木精的染色性能差,經過一百多年精心加工配制,現用的蘇木精配方,染色性能好,保持時間長,是世界上唯一的常規細胞核染料,

    2.蘇木精的配制

         蘇木精的配方很多,可根據不同需要選用,Harris配方最常用。

    1Harris蘇木精的配制

           蘇木精1g

          硫酸鋁鉀15g

          無水乙醇10ml

          蒸餾水200ml

          先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀,用無水乙醇溶解蘇木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀蒸餾水中,煮沸1min后,稍冷卻,慢慢加入紅色氧化汞0.5g,繼續加熱至染液變為紫紅色,用紗布蓋瓶口,用前濾紙過濾后每100ml加冰醋酸5ml。

    2Mayer蘇木精改良配法

          A液

          蘇木精2g

          無水乙醇40ml

          B液

          硫酸鋁鉀100g

          蒸餾水600ml

          稍加熱使硫酸鋁鉀在水中溶解,將蘇木精溶于酒精中,再將A液與B液混合煮沸2min。用蒸餾水補足600ml,加入400mg碘酸鈉充分混勻,蘇木精染液呈紫紅色。

    3Gill改良蘇木精染液的配制

          蘇木精2g

          無水乙醇250ml

          硫酸鋁鉀17g

         蒸餾水750ml

          碘酸鈉0.2g

          冰醋酸20ml

          先將蘇木精溶于無水乙醇,再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。兩液溶解后將其混合,加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色,再加入冰醋酸。

    3.伊紅溶液的配制

    1)水溶性伊紅

          伊紅Y0.51g

           蒸餾水100ml

          先將水溶性伊紅加入蒸餾水中,用玻璃棒將伊紅攪起泡沫后過濾,每100ml加冰醋酸1滴。

    2)乙醇性伊紅液的配制

          伊紅Y 0.51g

           90%酒精100ml

           先將伊紅溶于酒精中,用玻璃棒研碎溶解后,每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊紅液染細胞漿后不可經水洗直接用85%酒精脫水。

    4.鹽酸酒精分化液的配制

           濃鹽酸0.51ml

          75%酒精99ml

           此液用一段時間后需要延長或更換液體,新液分化時間要短。

          此文轉載:丁香通

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