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    病毒透射電鏡病毒標本制備實
    實驗方法原理 病毒研究中用磷鎢酸染色后發現在黑色背景中病毒粒子如同一個亮晶晶的「空洞」。爾后用磷鎢酸對飛噬菌體染色也見到同樣的現象,即將這種現象稱為「負染色」。負染色是一種反襯染色,即高密度物質如重金屬磷鎢酸、醋酸鈾等在透射電鏡下形成黑色的背景反襯低密度的標本如病毒為白色透亮,從而清楚地顯示出被襯物的細節結構。
    實驗材料   病毒
    試劑、試劑盒   負染色液
    儀器、耗材   透射電鏡
    實驗步驟
    負染色法主要有兩種:

    (1) 懸滴法:用一根細滴管或結核菌素注射器吸一滴標本懸液滴在有膜的銅網上,如帶膜銅網已從濾紙上取下,則此銅網很可能被吸到加標本的吸管頭上或注射器針頭上,銅網上也可能被翻轉而污染,故采用懸滴法時,應將帶膜銅網粘附于濾紙上,切不可取下。銅網滴上標本后靜置片刻,然后用濾紙從銅網邊上吸去多余的標本懸液,未待標本干燥即滴上負染色液。染色 1~2 min, 用濾紙吸去多余染液,再用蒸餾水滴在銅網上洗 1~2次,再用濾紙吸去水分,待干后用電鏡觀察。

    (2) 漂浮法:漂浮法是將有膜的銅網的膜面覆蓋漂浮于標本懸液上。具體方法是先將濾紙在加溫熔化的液體石蠟中浸漬后取出,干后即成帶蠟濾紙。用吸管吸取標本懸液滴于蠟濾紙上,將帶膜銅網覆蓋其上, 1~2 min 后用鑷子夾起銅網,用濾紙吸去多余的標本懸液,在另一蠟紙上滴一點負染色,將吸有標本的銅網膜面向下漂浮于負染色液滴上,染 1~2 min, 用鑷子夾起銅網,用濾紙吸去多余的染液,待干后用電鏡觀察。
    收起 
    注意事項 /
    其他
    負染色技術已是當代電鏡生物標本制備中一項應用普遍、效力較高而又比較簡便的技術,尤其在病毒學研究中,對揭示病毒的形態結構十分有效,對病毒學的發展起了較大的作用。

    負染色方法有如下突出的優點:明顯提高了標本的反差和分辨力。簡便易行,不要求高純度的標本制備。染色本身不改變生物標本的活性,不因染色而造成標本變形。
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