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  • NFkB濾板法檢測試劑
       核因子-kB(NF-kB)是一種轉錄因子,調控參與免疫反應、凋亡和細胞周期的基因表達。NF-kB可以由各種刺激物激活,這些刺激物有細胞因子、T、B細胞有絲分裂原、病毒蛋白、壓力誘導物。刺激導致其抑制物IkB的磷酸化,使NF-kB從IkB復合物中釋放出來。解離后,NF-kB從細胞質轉至細胞核,與靶DNA因子結合,正向調節靶基因的轉錄。檢測NF-kB的活性對研究NF-kB的激活及相關通路的潛在機制至關重要。美國Signosis公司研發的NF-kB濾板法檢測試劑與常規的凝膠遷移試驗不同,它是一種高通量的檢測方法,可同時分析多個標本,而且該方法較非放射的凝膠遷移試驗簡單的多,較基于P32的凝膠遷移試驗安全的多。
     A. 優點:
    簡單快速——比凝膠遷移試驗簡單、快速
    高通量篩選——多個樣品可在一個試驗中得到分析
    費用低廉——與基于ELISA的檢測方法相比花費更少
    定量比較——二個或以上樣本可同時定量分析
    B. 原理
            美國Signosis公司研發的NF-kB濾板法檢測試劑,是基于微孔板檢測NFkB活性的分析方法,該方法中使用二塊板——過濾板和雜交板,預標記NFkB的DNA結合序列與核抽體物混合,形成NFkB與預標記的DNA序列。過濾板用于保留結合的DNA序列,除去游離的DNA序列。結合的預標記的DNA序列隨后從過濾板上洗脫、收集,用于微孔板雜交。捕獲的DNA序列進一步用辣根酶標記的鏈霉親和素檢測,在微孔板發光檢測儀上讀取發光度值(RLUs)。


    此文轉載來源:丁香通


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