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  • 蛋白質檢測六


    蛋白印跡法

     抗原-抗體反應

    1 儀器和設備

          塑料盒、振蕩器。

    2 封閉

          一般采用5%脫脂奶粉進行封閉,室溫,30-60min。

         *封閉液的濃度可以是(1%-5%),根據自己的條件摸索濃度就可以。

          封閉液的配置除了PBS-T液之外也可以使用TBS-T液或10mmol/L Tris-HCL(PH 7.4)溶液。

    3 一抗的處理

          (1)一抗稀釋倍數:根據樣本和抗體的種類不同,預實驗尋找選擇最適稀釋倍數。

          (2)一抗孵育時間:一抗的孵育時間是從幾個小時到過夜不等,建議使用較高較高的稀釋倍數和較長的孵育時間來保證特異性結合。一抗過高會產生非特異性條帶。

          (3)一抗孵育時間:盡可能低溫孵育,特別是磷酸化一抗過夜時應在4℃進行,否則會產生污染而破壞磷酸化蛋白。

          *孵育一抗最好在搖床上進行,防止結合不均勻。


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