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  • 凝膠遷移或電泳遷移率實驗

          凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。通常將純化的蛋白或細胞粗提液和標記的DNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電涌   上,分離復合物和非結合的探針,DNA-復合物比非結合的探針移動慢。常用實驗手段有同位素32P法和非同位素法(化學發光法)。標記探針根據研究結合蛋白的不同,可以是雙鏈或是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結 合蛋白,可以純化蛋白,粗蛋白或核細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA片段和寡聚糖核苷酸片段(特異)和其他非相關的片段(非特異性)來確定DNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異性和非特異性片段的存在下,依據復合物的特點和強度來確定特異性結合。


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