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    知否。知否。細胞劃痕應是這樣做!

    為什么要做細胞劃痕實驗?


           細胞劃痕(修復)法是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后再繼續培養細胞至實驗設定的時間,然后取出細胞培養板,觀察周邊細胞是否生長(修復)至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。


    細胞劃痕(中洪實拍圖 勿盜)


    實驗步驟:


           將所需的材料進行滅菌,包括直尺和marker筆。

           1、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻的劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。


           2、在孔中加入約5×105個細胞,具體數量因細胞種類不同而不同,接種原則為過夜后融合率達到100%。


           3、第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)。


           4、PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養基。


           5、放入37℃ 5% CO2培養箱,培養??砂?,6,12,24h時間點取樣,拍照(具體時間依實驗需要而定)。


    細胞劃痕實驗注意事項:


           1、在用PBS緩沖液沖洗時,注意貼壁慢慢加入,以免沖散單層貼壁細胞,影響實驗拍照結果。


           2、一般做劃痕實驗,都是無血清或者低血清(<2%)否則細胞增殖就不能忽略。


           3、按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,作為固定的檢測點,以解決了前后觀察時位置不固定的問題。


    劃痕法測量遷移的不足之處


           適用的細胞范圍小,一般只能適用于上皮細胞、纖維樣細胞劃痕法的不足也很明顯,適用的細胞系很窄,一般只能用于上皮,纖維樣細胞系。因為:


           (1)這些細胞本身有遷移能力,且較強;


           (2)細胞有極性,方便測量,觀察;


           (3)細胞對無血清有較強的忍受力(至少24h),因此很多腫瘤細胞系是不適合做劃痕的。





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