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  • 微生物的接種、分離和培養

    實驗方法原理

     微生物的接種分離和培養是做細胞代謝分析和體外實驗的基本步驟之一,接種分離的好壞直接影響微生物的培養以及后續的實驗操作和結果(1)用于細胞分離(2)細胞純化(3)細胞增殖培養。

    實驗材料      大腸桿菌  枯草桿菌  金黃色葡萄球  菌酵母菌
    試劑、試劑盒     來蘇爾  石炭酸溶液  福爾馬林  牛肉膏  蛋白胨
    儀器、耗材      恒溫培養箱  接種環   酒精燈
    實驗步驟
    1、微生物接種:指將微生物純種或含菌材料轉移到另一營養基質上的過程。根據不同的目的可以采用不同的接種方法,如平板劃線法,涂布法,傾注法等。

    2、微生物分離:指依據微生物的特征,采用各種方法從含菌樣品中獲得由單一個體(如單一菌體或孢子)或一段菌絲生長繁殖形成的微生物群體的過程。常用的分離方法有平板劃線法,稀釋涂布法,平板分離法,稀釋傾注平板分離法和單細胞分離法。 平板分離法的基本原理包括兩個方面:(1)選擇適合于待分離微生物生長條件,如營養、酸堿度、溫度和氧的要求或加入某抑制劑造成只利于該微生物生長的環境。(2)微生物在固體培養基上生長形成的單個菌落可以是由一個細胞繁殖而成的集合體,因此可以通過挑取單菌落而獲得一種純培養。值得指出的是從微生物群體上生長形成的單個菌落可以并不一定保證是純培養。

    3、微生物培養:指微生物被接種到營養基質后,在一定條件下生長繁殖的過程,分需氧培養法和厭氧培養法。
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    注意事項
    1. 在接種時,需要在酒精燈旁操作,以維持一個相對無菌的環境。接種環與試管口不得任意放在桌上或與其他物品相接觸。

    2. 平板或斜面的劃線需要迅速、輕捷,不要劃破培養基。

    3. 接種完畢后將接種環抽出,灼燒一下管口,塞上硅膠塞,塞硅膠塞時請勿用試管口去迎硅膠塞,以免試管在流動空氣中納入不潔空氣。

    4. 做平板分區劃線分離時,劃完一小區,均勻將接種環徹底灼傷滅菌,待冷卻后再劃下一小區。

    5. 所有的培養器皿均需要嚴格滅菌。
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    其他
    1. 菌落是由單個或少數細胞在固體培養基表面或里面生長繁殖所形成的肉眼可見的子細胞群體。菌落形態會因菌種不同或菌種相同但所用的培養基、培養溫度、PH值和時間等條件不同而存在不同程度的差異。若所用的培養基、培養溫度和時間條件相同,則同一種菌所形成的菌落形態具有相對的穩定性和統一性。

    2. 純培養的確定除了觀察其菌落特征外,還要結合顯微鏡檢測個體形態特征后才能決定,有些微生物的純培養要經過一系列的分離與純化過程和多樣性特征鑒定才能確定。
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