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    細胞凍存與復蘇

    背景介紹:

    細胞凍存是保存細胞的主要方法之一。低溫條件可降低細胞的生命活力、代謝速度和對營養的需求。在0℃以下的冰凍條件下,細胞內生命分子的熱運動和化學反應受到了極大地限制,細胞處于代謝最低甚至停滯狀態。因此利用凍存技術,將細胞置于-196℃的液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種的危險,起到了細胞保種的作用。

    細胞凍存較難處理的技術環節是細胞通過0℃這一溫度點時由于細胞內外的水分結冰造成的冰凌形成,這些冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞并引起細胞死亡。因此,在細胞凍存時向培養液中加入保護劑(甘油或DMSO),可以使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶的形成,可避免細胞損傷。

    采用“慢凍快融”的方法能較好的保證細胞活力的保存。標準冷凍速度開始為-2℃--1℃/min,當溫度低于-25℃時可加速降溫,到-80℃之后可直接投入液氮(-196℃)內,復蘇細胞時則采取突然蘇醒的方式,直接將-196℃下裝有細胞的凍存管投入37-40℃的熱水中迅速化凍??焖俚鼗謴偷秸囟?,使細胞內外不會形成較大的冰晶,也不會暴露在高濃度溶質的溶液中過長時間??焖購吞K使細胞迅速回到正常溫度下,恢復其生長和代謝機能。


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