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    CRISPR/Cas9 抗體最新發布
    要說近兩年生物醫藥領域最火的兩個詞,那絕對是 CRISPR/Cas9 和 CAR-T,并且可以預見未來幾年它們將繼續吸引我們的眼球。2012 年才首次報道 CRISPR/Cas9 可用于基因編輯,到 2015 年開始風靡全球,它的發展速度令世界矚目。

    基因編輯能夠對基因進行精確操作,并且以高效率、低成本的優勢實現基因定點刪除,突變,敲入等。 目前 CRISPR/Cas9 的主要應用領域是基因敲除,在基礎研究領域已經展現出強大的優勢,但是在臨床應用中,由于潛在的脫靶效應,應用仍然受到限制。在基礎研究領域中,CRISPR 技術日漸成熟,當然每家公司所使用的具體 protocol 跟質粒載體不盡相同,做出來的穩定細胞株還是有點差異的,編者就不多贅述。還有少數公司比如漢尹公司,也可以利用 CRISPR/Cas9 技術去提高細胞內源基因的表達,效果可以與轉染過表達質粒相媲美,避免了外源基因對細胞的影響,優勢顯而易見。

    作為一家成熟的抗體公司,我們也會利用 CRISPR/Cas9 去 knockout 做敲除驗證,這對于抗體特異性的判斷是用 siRNA 所不能比的。如果研究人員經常利用 CRISPR/Cas9 技術做功能驗證的話,針對 Cas9 的抗體顯得尤為必要,這里有好奇的人會問道,在 Cas9 基因隨便加個標簽不就完事了?編者只能嚴謹地告訴大家,這種做法是不嚴謹的。插入基因會一定程度上改變 Cas9 的結構,其功能肯定也會隨著結構的變化而變化。檢測免疫熒光或流式時,如果標簽被包埋在 Cas9 蛋白中,還會出現假陰性結果。這里還存在一點,如果標簽抗體的特異不是太好的話,針對 Cas9 的檢測就等于白做了。如果有完美的 Cas9 特異性抗體可供選擇的話,為何不用呢?





    雖然 CRISPR/Cas9 已經成為體外基因組編輯的最流行系統,但體內的基因編輯方法仍然受到 Cas9 導入問題的限制。腺相關病毒載體(AAV)因免疫原性低而常用于基因的體內導入。不過,由于 AAV 只能容納~4.5 kb,化膿鏈球菌(spCas9)和 gRNA(總共~4.2 kb)要包裝到 AAV 載體中還是很有挑戰性的。研究人員隨后在 Cas9 的同源物中,找到了金黃色葡萄球菌的 Cas9(SaCas9),證明其在哺乳動物細胞中表現出切割活性。并且長度適合插入 AAV 載體中,效率與 SpCas9 相似,適合體內研究。

    既然 SaCas9 有應用價值,針對于 SaCas9 的抗體當然必不可少。






                                                                                                                                                                                                                                                                                                             本文

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