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    【動物實驗】-大鼠冠狀病毒和仙臺病毒的雙重PCR檢測方法的建立與應用

    目的:建立快速檢測實驗大鼠冠狀病毒和仙臺病毒的雙重PCR方法?

    方法:根據大鼠冠狀病毒 N 基因?仙臺病毒 L 基因設計特異性引物;經過雙重PCR優化,特異性和敏感性的檢測,建立雙重PCR體系? 應用該 PCR體系檢測人工感染仙臺病毒組織DNA樣本和實驗動物組織樣本,并與ELISA方法比對?

    結果:雙重PCR擴 增出大鼠冠狀病毒(168bp)和仙臺病毒(262bp)目的條帶,PCR擴增產物測序結果利用核酸BLAST功能進行同源 序列對比,仙臺病毒和大鼠冠狀病毒同源性分別為100%和99%? 仙臺病毒和大鼠冠狀病毒的檢測下限為1.56× 102copies/μL? 特異性檢測對小鼠肝炎病毒擴增,產生片段大小近似大鼠冠狀病毒產物? 應用建立的雙重PCR體 系檢測人工感染仙臺病毒組織DNA樣本,30份DNA標本均被檢出;檢測94份實驗動物肺組織樣本,結果均陰性?

    結論:建立的雙重PCR方法操作簡單?快速?特異性強?靈敏度高,能夠實現對實驗動物仙臺病毒和大鼠冠狀病毒 病原體的快速檢測?

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